1. Klassifikatsioon
Geelelektroforees jaguneb vertikaalseteks (sh kolonngeelid ja plaatgeelid) ja horisontaaltüüpideks (peamiselt plaatgeelid) (joonis 6-18). Üldiselt on vertikaalne eraldamine veidi parem kui horisontaalne, kuid horisontaalsel geeli valmistamisel on vähemalt neli eelist: kogu geeli all on tugi, mis võimaldab kasutada madala kontsentratsiooniga agaroosi; võimalik valmistada erineva spetsifikatsiooniga agaroosi geelplaate; geeli ettevalmistamine ja proovi laadimine on mugavam; elektroforeesikambrit on lihtne ehitada ja see on kulutõhus. Kuna horisontaalset elektroforeesi viiakse läbi nii, et agaroosgeelplaat on täielikult sukeldatud umbes 1 mm elektroforeesipuhvri pinnast allapoole, nimetatakse seda ka sukelelektroforeesiks.
Elektroforeesipaak DYCP-31DN agaroosgeelelektroforeesi jaoks
2. Puhversüsteem
Nukleiinhapete eraldamisel kasutavad enamik süsteeme pidevaid süsteeme. Tavaliselt kasutatavate elektroforeesipuhvrite hulka kuuluvad TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l boorhape, 0,0024 mol/l EDTA) puhver ja THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l). naatriumatsetaat, 0,0018 mol/l EDTA) puhver. Need puhvrid valmistatakse tavaliselt 10x põhilahustena ja lahjendatakse kasutamisel vajaliku kontsentratsioonini. Lineaarse ja tsirkulaarse DNA migratsioonikiirused agaroosgeelis varieeruvad sõltuvalt kasutatud puhvrist. THE puhvris on lineaarse DNA migratsioonikiirus suurem kui tsirkulaarsel DNA-l, samas kui TBE puhvris on vastupidine.
3.Agarose geeli valmistamine
(1) Horisontaalse agaroosigeeli valmistamine
(a) Valmistage ette vajalik kontsentratsioon agaroosgeeli, kasutades 1x elektroforeesipuhvrit.
b) Kuumutage agaroosi kuni täieliku lahustumiseni kas keeva veevannil, magnetseguril või mikrolaineahjus. Jahutage agaroosilahus temperatuurini 55 °C ja lisage etiidiumbromiidi (EB) värvaine lõppkontsentratsioonini 0,5 μg/ml.
(c) Tihendage klaas- või akrüülplaatide servad väikese koguse agaroosgeeliga, lisage kamm ja asetage kammi hambad umbes 0,5–1,0 mm plaadist kõrgemale.
(d) Valage sulatatud agaroosigeeli lahus pidevalt klaas- või akrüülplaadivormi (paksus sõltub DNA proovi mahust), vältides õhumullide sattumist. Laske toatemperatuuril loomulikult taheneda.
(e) Pärast täielikku tahkumist eemaldage kamm ettevaatlikult. Lisage geelipaaki sobiv kogus elektroforeesipuhvrit, tagades, et geeliplaat oleks umbes 1 mm elektroforeesipuhvri pinnast allpool.
(2) Vertikaalse agaroosigeeli valmistamine
a) Eemaldage rasv või jäägid klaasplaatidelt etanooliga pestes.
(b) Asetage vaheplaadid esi- ja tagatammide vahele, joondage vaheplaatide servad eesmise ja tagumise tammiga ning kinnitage need klambritega.
(c) Lisage vaheplaatide servade vahele 2% agaroosi 1x puhvris, et moodustada geelivalamiskambri põhjas 1 cm kõrgune agaroosikork.
(d) Valage 1x puhvris valmistatud soovitud kontsentratsiooniga sulanud agaroosigeel geelikambrisse kuni 1 cm ülaosast allpool.
(e) Sisestage kamm, vältides õhumullide sattumist kammi hammaste alla. Mõnikord võivad agaroosigeeli jahutamisel kammihammastele tekkida kortsud; sellistel juhtudel lisage tahkumiseks ülaosale lihtsalt veidi sulatatud agaroosi.
(f) Eemaldage kamm. Laadimispilusse puhvri lekke vältimiseks tihendage agaroosi geelplaadi ja elektroforeesikambri vaheline ühendus 2% agaroosiga ja lisage vajalik kogus puhvrit.
(g) Lisage geelikambrisse 1x elektroforeesi puhver.
(h) Laadige DNA proovid ettevaatlikult puhvri all olevale agaroosgeelile.
Rohkem infot agaroosgeelelektroforeesi põhiteadmiste kohta jagame järgmisel nädalal. Soovin, et see teave oleks teie katse jaoks kasulik.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) on rohkem kui 50 aastat spetsialiseerunud elektroforeesiinstrumentide tootmisele koos meie professionaalse tehnilise meeskonna ning uurimis- ja arenduskeskusega. Meil on usaldusväärne ja terviklik tootmisliin projekteerimisest ülevaatuseni ja ladu ning turundustugi. Meie peamised tooted on elektroforeesielement (paak/kamber), elektroforeesi toiteallikas, sinine LED-transilluminaator, UV-transilluminaator, geelpildi- ja analüüsisüsteem jne.
Otsime nüüd koostööpartnereid, oodatud on nii OEM elektroforeesipaak kui ka edasimüüjad.
Kui teil on meie toodete ostuplaan, võtke meiega kindlasti ühendust. Võite saata meile sõnumi e-posti aadressile[e-postiga kaitstud]või[e-postiga kaitstud], või helistage meile numbril +86 15810650221 või lisage Whatsapp +86 15810650221 või Wechat: 15810650221.
Whatsappis või WeChatis lisamiseks skannige QR-kood.
Postitusaeg: 07. detsember 2023