Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) on tundlik ja kiire tehnika, mida kasutatakse peamiselt DNA kahjustuste tuvastamiseks ja parandamiseks üksikutes rakkudes. Nimetus "Comet Assay" tuleneb iseloomulikust komeeditaolisest kujust, mis ilmneb tulemustes: raku tuum moodustab "pea", samal ajal kui kahjustatud DNA fragmendid rändavad, luues komeeti meenutava "saba".
Põhimõte
Comet Assay põhimõte põhineb DNA fragmentide migratsioonil elektriväljas. Intaktne DNA jääb raku tuuma sisse, samas kui kahjustatud või killustatud DNA migreerub anoodi poole, moodustades komeedi "saba". Saba pikkus ja intensiivsus on otseselt võrdelised DNA kahjustuse ulatusega.
Menetlus
- Rakkude ettevalmistamine: Testitavad rakud segatakse madala sulamistemperatuuriga agaroosiga ja jaotatakse mikroskoobi alusklaasidele, et moodustada ühtlane kiht.
- Rakkude lüüs: slaidid kastetakse lüüsilahusesse, et eemaldada rakumembraan ja tuumamembraan, paljastades DNA.
- Elektroforees: Slaidid asetatakse leeliselistes või neutraalsetes tingimustes elektroforeesikambrisse. Kahjustatud DNA fragmendid migreeruvad elektrivälja mõjul positiivse elektroodi poole.
- Värvimine: Pärast elektroforeesi värvitakse objektiklaasid DNA visualiseerimiseks fluorestsentsvärviga (nt etiidiumbromiidiga).
- Mikroskoopiline analüüs: Fluorestsentsmikroskoobi või spetsiaalse tarkvara abil analüüsitakse komeedi kuju ja mõõdetakse parameetreid, nagu saba pikkus ja intensiivsus.
Pilt biorenderist
Andmete analüüs
Comet Assay tulemusi hinnatakse mitme põhiparameetri alusel:
- Saba pikkus: tähistab vahemaad, mille kaudu DNA rändab, näidates DNA kahjustuse ulatust.
- Saba DNA sisu: sabasse migreeruva DNA protsent, mida kasutatakse sageli DNA kahjustuse kvantitatiivseks mõõtmiseks.
- Oliivisaba hetk (OTM): Ühendab nii saba pikkuse kui ka saba DNA sisalduse, et pakkuda DNA kahjustuste põhjalikumat mõõtmist.
Rakendused
- Genotoksilisuse uuringud: Comet Assay't kasutatakse laialdaselt kemikaalide, ravimite ja kiirguse mõju hindamiseks raku DNA-le, muutes selle genotoksilisuse testimisel oluliseks vahendiks.
- Keskkonnatoksikoloogia: see aitab analüüsida keskkonnasaasteainete mõju organismide DNA-le, pakkudes ülevaadet ökosüsteemi ohutusest.
- Meditsiinilised ja kliinilised uuringud: Comet Assay't kasutatakse DNA parandamise mehhanismide, vähi ja muude DNA-ga seotud haiguste uurimiseks. Samuti hinnatakse vähiravi, nagu kiiritusravi ja keemiaravi, mõju DNA-le.
- Toidu- ja põllumajandusteadused: kasutatakse pestitsiidide, toidu lisaainete ja muude ainete ohutuse hindamiseks ning nende toksiliste mõjude uurimiseks loommudelitel.
Eelised
- Kõrge tundlikkus: suudab tuvastada vähesel määral DNA kahjustusi.
- Lihtne operatsioon: Tehnika on lihtne, mistõttu sobib see suure läbilaskevõimega sõelumiseks.
- Lai rakendus: Seda saab rakendada erinevatele rakutüüpidele, sealhulgas looma- ja taimerakkudele.
- Kvantifitseerimise väljakutsed: DNA kahjustuste kohta kvalitatiivseid andmeid pakkudes tugineb kvantitatiivne analüüs suuresti tarkvara- ja pildianalüüsi tehnikatele.
- Katsetingimused: Tulemusi võivad mõjutada sellised tegurid nagu elektroforeesi aeg ja pH, mis nõuavad katsetingimuste hoolikat kontrolli.
Piirangud
Comet Assay on hindamatu tööriist biomeditsiinilistes uuringutes, keskkonnateadustes ja ravimite väljatöötamises tänu oma paindlikkusele ja suurele tundlikkusele DNA kahjustuste tuvastamisel ja parandamisel. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)pakub komeedi testimiseks horisontaalset elektroforeesikambrit. Tere tulemast meiega ühendust võtma, et arutadaKomeedi analüüsprotokolli.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) on rohkem kui 50 aastat spetsialiseerunud elektroforeesiinstrumentide tootmisele koos meie professionaalse tehnilise meeskonna ning uurimis- ja arenduskeskusega. Meil on usaldusväärne ja terviklik tootmisliin projekteerimisest ülevaatuseni ja ladu ning turundustugi. Meie peamised tooted on elektroforeesielement (paak/kamber), elektroforeesi toiteallikas, sinine LED-transilluminaator, UV-transilluminaator, geelpildi- ja analüüsisüsteem jne. Tarnime ka laboriseadmeid, nagu PCR-i instrument, keerismikser ja labori tsentrifuug.
Kui teil on meie toodete ostuplaan, võtke meiega kindlasti ühendust. Võite saata meile sõnumi e-posti aadressile[e-postiga kaitstud]või[e-postiga kaitstud], või helistage meile numbril +86 15810650221 või lisage Whatsapp +86 15810650221 või Wechat: 15810650221.
Whatsappis või WeChatis lisamiseks skannige QR-kood.
Postitusaeg: 20. september 2024