Põhimõte
Tselluloosatsetaatkile elektroforees on elektroforeesi meetod, milles kasutatakse toena tselluloosatsetaatkilet. Nähtust, kus laetud osakesed liiguvad elektrivälja toimel vastaselektroodi poole, nimetatakse elektroforeesiks. Kuna igal valgul on spetsiifiline isoelektriline punkt, siis kui valk asetatakse lahusesse, mille pH on selle isoelektrilisest punktist madalam, on valk positiivselt laetud ja liigub negatiivse elektroodi poole. Vastupidi, see liigub positiivsele poolusele. Kuna valgusmolekulide liikumiskiirus elektriväljas on seotud nende laenguga, molekulide kuju ja suurusega, saab erinevaid valke elektroforeesiga eraldada. Seerum sisaldab mitmesuguseid valke, millel kõigil on isoelektrilised punktid pH 7,5 või madalamal. Kui seerum asetatakse elektroforeesi läbiviimiseks pH väärtusega 8,6 puhvrisse, on kõik seerumi valgud negatiivselt laetud ja liiguvad elektriväljas positiivse poole suunas. Kuna erinevatel seerumivalkudel on sama pH juures erinevad laengud, on molekulaarosakesed erineva suurusega ja seega erinev ka migratsioonikiirus ning need eraldatakse elektroforeesiga. Seerumivalkude isoelektrilised punktid ja molekulmassid on näidatud allolevas tabelis:
| Valk | Isoelektrilised punktid (PI) | Molekulmass |
| Albumiin | 4.88 | 69 000 |
| α1-gluuliin | 5.00 | 200 000 |
| α2-gluuliin | 5.06 | 300 000 |
| β-gluuliin | 5.12 | 9 000–150 000 |
| γ-gluuliin | 6,85-7,50 | 156 000–300 000 |
Katse eesmärk on eraldada vereseerumis erinevad valgud, kasutades tugikeskkonnana tselluloosatsetaatmembraani (lühend CAM). CAM on omamoodi vahustatud loosehea ühtlase kile paksusega 0,1–1,5 mm, millel on teatav veeimavus.
Materjalid, instrumendid ja reaktiivid CAM-elektroforeesi jaoks
Näidised:terve inimese vereseerum
Instrument:toiteallikas DYY-6C, elektroforeesipaak DYCP-38C, suurepärane proovi laadimine WD-9404
Reaktiivid
1) tselluloosatsetaatmembraan 7X9cm
2) PH 8,6 barbitooli puhverlahus (ioontugevus 0,05–0,09, aeg on 0,06 korda): võtke 1,84 g dietüülbarbituurhapet ja seejärel 1,03 g dietüülnaatriumpentobarbitaali, lisage lahustumiseks kuumutamiseks veidi destilleeritud vett ja valmistage kuni 1000 ml;
3) plekk: Ponceau S 0,2g, trikloroäädikhape 3g, lisage 100ml destilleeritud vett;
4) TBS/T või PBS/T: 45ml 95% etanooli, 5ml jää-äädikhapet, lisage 50ml destilleeritud vett;
5) Puhastuslahus: 70 ml veevaba etanooli, 30 ml jää-äädikhapet.
Katsemeetodd
1) Valmistage membraan ette: kastke membraan 30 min-8h barbitooli puhverlahusesse ja võtke see välja, eemaldage liigne lahus imava paberiga.
2) Proovide laadimine: eristage membraani kare ja sile külg ning märkige 1,5 cm kaugusele joon 1,5 cm kaugusele kareda külje ülemisest otsast. Laadige proovid parema proovilaadimistööriistaga töötlemata poolelt. Märkus. Proovid tuleb laadida membraani karedale küljele. Kui seerumiproovid on täielikult membraani tunginud, keerake membraan ümber, asetage kare pool (koos proovidega) allapoole paagi poole ja proovidega ots asetatakse negatiivsesse elektroodi.
3) Elektroforees: lülitage toide sisse, 0,4～0,6 m A/cm membraan, tööaeg 30-45 min. Pärast elektroforeesi käivitamist lülitage toide välja.
4) Värvige ja puhastage: võtke paagist membraan välja ja kastkeit värvilahusesse 5 minutiks ja seejärel puhastage seda puhastuslahuses ikka ja jälle 3-4 korda, kuni taustavärv on selge. Seerumivalgud tuleks näidata ribadel ja tavaliselt on viis tsooni, mis moodustavad märgitud joone ülemisest otsast, albumiin, α1-glouliin, α2-gluuliin, β-gluuliin, γ-glouliin.
5) Säilitamine: pange kuiv elektroforeesbändpuhastuslahuses 10-15 minutit, seejärel võtke see välja ja kleepige puhtale klaasile, pärast kuivamist muutub see läbipaistvaks kileksbänd.
KatsetageTulemus
Seerumiproovide eraldusefekt on hea ja ribade tekkimist ei esine. Tulemuste korratavus on olenevalt katseprotseduuridest ja katse läbiviija meetoditest erinev ning korratavus on kõrge.
Järeldus
Kiire kliiniline elektroforeesi tuvastamise süsteem (Elektroforeesi paakDYCP-38C,toiteallikasDYY-6C ja suurepärane proovide laadimine WD-9404), mis on toodetud meie pooltettevõte Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdvastab katsenõuetele,jatulemused on reprodutseeritavad, lihtsad ja kiired, sobivadõpetamineuurimine.
Pekingi LiuyiBiotechnology Co., Ltd on spetsialiseerunud elektroforeesitoodete tootmisele bioteaduste tööstusele, misomab Hiinas enam kui 50-aastast ajalugu ning ettevõte suudab pakkuda stabiilseid ja kvaliteetseid tooteid kogu maailmas. Läbi aastatepikkuse arendustegevuse on see teie valikut väärt!
Otsime nüüd koostööpartnereid, oodatud on nii OEM elektroforeesipaak kui ka edasimüüjad.
Meie kohta lisateabe saamiseks võtke meiega ühendust e-posti teel[e-postiga kaitstud]või[e-postiga kaitstud].
Postitusaeg: 14.11.2022