Katse põhimõte
Hemoglobiini elektroforeesi eesmärk on tuvastada ja kinnitada erinevaid normaalseid ja ebanormaalseid hemoglobiine.
Erinevate hemoglobiinitüüpide erinevate laengute ja isoelektriliste punktide tõttu, teatud pH puhverlahuses, kui hemoglobiini isoelektriline punkt on madalam kui puhverlahuse pH, kannab hemoglobiin negatiivse laengu ja migreerub elektroforeesi käigus anoodi suunas. Ja vastupidi, positiivse laenguga hemoglobiin liigub katoodi poole.
Teatud pinge all ja pärast kindlat elektroforeesiaega on erineva laengu ja molekulmassiga hemoglobiinidel erinevad migratsioonisuunad ja -kiirused. See võimaldab eraldada erinevad tsoonid ja nendes tsoonides saab teha järgneva kolorimeetrilise või elektroforeetilise skaneerimise analüüsi, et määrata erinevate hemoglobiinide kvantifitseerimine. Kõige sagedamini kasutatav meetod on pH 8,6 tselluloosatsetaatmembraani elektroforees.
Tsütoplasmas oksüdeeritakse glükogeenis või polüsahhariidsetes ainetes (nagu mukopolüsahhariidid, mukoproteiinid, glükoproteiinid, glükolipiidid jne) esinevad etüleenglükoolirühmad (CHOH-CHOH) perioodilise happe toimel ja muudetakse aldehüüdrühmadeks (CHO-CHO). Need aldehüüdrühmad ühinevad värvitu lillakaspunase Schiffi reagendiga, moodustades lillakaspunase värvaine, mis ladestub kohtadesse, kus rakus on polüsahhariide. Seda reaktsiooni tuntakse perioodilise happe-Schiffi (PAS) värvimisena, mida varem nimetati glükogeeni värvimiseks.
Katsemeetod
Materjalid:Tselluloosatsetaatmembraan, elektroforeesiaparaat(DYCP-38C ja toiteallikas DYY-6C), Suurepärane proovide laadimise tööriist (pipetiga), spektrofotomeeter, kolorimeetrilised küvetid, puhvrid.
Puhver:
(1) pH 8,6 TEB puhver: kaaluge 10,29 g Tris, 0,6 g EDTA, 3,2 g boorhapet ja lisage destilleeritud vett 1000 ml-ni.
(2) Boraatpuhver: kaaluge 6,87 g booraksit ja 5,56 g boorhapet ning lisage destilleeritud vett 1000 ml-ni.
Menetlus:
Phemoglobiinilahuse parandamine
Võtke 3 ml verd, mis sisaldab antikoagulandina hepariini või naatriumtsitraati. Tsentrifuugige kiirusel 2000 p / min 10 minutit ja visake plasma ära. Peske punaseid vereliblesid kolm korda füsioloogilise soolalahusega (750 pööret minutis, iga kord 5-minutiline tsentrifuugimine). Tsentrifuugige kiirusel 2200 p/min 10 minutit ja visake supernatant ära. Lisage võrdne kogus destilleeritud vett ja seejärel 0,5-kordne maht süsiniktetrakloriidi. Loksutage tugevalt 5 minutit ja seejärel tsentrifuugige kiirusel 2200 p/min 10 minutit, et koguda ülemine Hb lahus hilisemaks kasutamiseks.
Membraani leotamine
Lõika tselluloosatsetaatmembraan ribadeks mõõtmetega 3 cm × 8 cm. Leotage neid pH 8,6 TEB puhvris kuni täieliku küllastumiseni, seejärel eemaldage ja kuivatage filterpaberiga.
Täpistamine
Kasutage pipeti, et 10 μl hemoglobiinilahust vertikaalselt tselluloosatsetaadi membraanile (kare külg), servast umbes 1,5 cm kaugusele.
Elektroforees
Valage boraadi puhverlahus elektroforeesikambrisse. Asetage tselluloosatsetaadi membraan täpilise poolega kambri katoodi otsa. Töötage 200 V juures 30 minutit.
Elueerimine
Lõigake välja HbA ja HbA2 tsoonid, asetage need eraldi katseklaasidesse ja lisage vastavalt 15 ml ja 3 ml destilleeritud vett. Hemoglobiini täielikuks elueerimiseks loksutage õrnalt, seejärel segage.
Kolorimeetria
Nullitakse neelduvus, kasutades elueerimislahuse jaoks destilleeritud vett, ja mõõdetakse neelduvus lainepikkusel 415 nm.
Arvutamine
HbA2 (%) = HbA2 tuubi neeldumine / (HbA tuubi neeldumine × 5 + HbA2 tuubi neeldumine) × 100%
Katsetulemuste arvutamine
Võrdlusvahemik pH 8,6 TEB puhvri tselluloosatsetaatelektroforeesi jaoks: HbA > 95%, HbA2 1%-3,1%
Märkmed
Elektroforeesi aeg ei tohiks olla liiga pikk. Tselluloosatsetaadi membraan ei tohiks elektroforeesi ajal kuivada. Lõpetage elektroforees, kui HbA ja HbA2 on selgelt eraldatud. Pikaajaline elektroforees võib põhjustada ribade difusiooni ja hägusust.
Vältige liiga suure proovi kasutamist. Liigne hemoglobiinisisaldus võib põhjustada ribade eraldumist või ebapiisavat värvumist, mille tulemuseks on vale kõrgenenud HbA tase.
Vältida tselluloosatsetaatmembraani saastumist valkudega.
Vool ei tohiks olla liiga suur; vastasel juhul ei pruugi hemoglobiiniribad eralduda.
Kaasake kontrollidena alati normaalsetelt isikutelt võetud proovid ja vajalikud teadaolevad ebanormaalsed hemoglobiinid.
Beijing Liuyi Biotechnology toodab professionaalset hemoglobiini elektroforeesi elektroforeesipaaki, mis on mudelDYCP-38Ctselluloosatsetaatmembraani elektroforeesipaak ja tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesipaagi jaoks on saadaval kaks elektroforeesi toiteallika mudelitDYY-2CjaDYY-6Ctoiteallikas.
Samal ajal pakub Beijing Liuyi Biotechnology klientidele tselluloosatsetaatmembraani ja tselluloosatsetaatmembraani suurust saab kohandada. Tere tulemast küsima meilt näidiseid ja lisateavet.
Beijing Liuyi kaubamärgil on Hiinas enam kui 50-aastane ajalugu ning ettevõte suudab pakkuda stabiilseid ja kvaliteetseid tooteid kogu maailmas. Läbi aastatepikkuse arendustegevuse on see teie valikut väärt!
Otsime nüüd koostööpartnereid, oodatud on nii OEM elektroforeesipaak kui ka edasimüüjad.
Kui teil on meie toodete ostuplaan, võtke meiega kindlasti ühendust. Võite saata meile sõnumi e-posti aadressile[e-postiga kaitstud]või[e-postiga kaitstud], või helistage meile numbril +86 15810650221 või lisage Whatsapp +86 15810650221 või Wechat: 15810650221
Postitusaeg: 20. september 2023