Polüakrüülamiidi geelelektroforees
Geelelektroforees on kõigi bioloogiliste distsipliinide laborites põhiline meetod, mis võimaldab eraldada makromolekule nagu DNA, RNA ja valgud. Erinevad eraldusvahendid ja mehhanismid võimaldavad nende molekulide alamhulka tõhusamalt eraldada, kasutades ära nende füüsikalisi omadusi. Eelkõige valkude puhul on polüakrüülamiidgeelelektroforees (PAGE) sageli valitud tehnika.
PAGE on tehnika, mis eraldab makromolekulid, näiteks valgud, lähtudes nende elektroforeetilisest liikuvusest, st analüütide võimest liikuda vastupidise laenguga elektroodi poole. PAGE-s määrab selle molekuli laeng, suurus (molekulmass) ja kuju. Analüüdid liiguvad läbi polüakrüülamiidgeelis moodustunud pooride. Erinevalt DNA-st ja RNA-st erinevad valkude laengud vastavalt lisatud aminohapetele, mis võib mõjutada nende toimimist. Aminohappestringid võivad moodustada ka sekundaarseid struktuure, mis mõjutavad nende näivat suurust ja sellest tulenevalt ka seda, kuidas nad on võimelised läbi pooride liikuma. Seetõttu võib mõnikord olla soovitav valke enne elektroforeesi denatureerida, et need lineariseerida, kui on vaja täpsemat suuruse hinnangut.
SDS-LEHT
Naatriumdodetsüülsulfaatpolüakrüülamiidgeelelektroforees on meetod, mida kasutatakse 5–250 kDa massiga valgumolekulide eraldamiseks. Valgud eraldatakse ainult nende molekulmassi alusel. Geelide valmistamisel lisatakse naatriumdodetsüülsulfaati, anioonset pindaktiivset ainet, mis varjab valguproovide sisemisi laenguid ja annab neile sarnase laengu ja massi suhte. Lihtsamalt öeldes denatureerib see valgud ja annab neile negatiivse laengu.
Oma LEHT
Native PAGE on tehnika, mis kasutab valkude eraldamiseks denatureerimata geele. Erinevalt SDS PAGE-st ei lisata geelide valmistamisel denatureerivat ainet. Selle tulemusena toimub valkude eraldumine valkude laengu ja suuruse alusel. Selle tehnika puhul on eraldumine sõltuvad valkude konformatsioonist, voltimisest ja aminohappeahelatest. Valgud selles protsessis ei kahjustata ja neid saab pärast eraldamise lõpetamist taastada.
Kuidas polüakrüülamiidgeelelektroforees (PAGE) töötab?
PAGE põhiprintsiip on analüütide eraldamine, lastes need elektrivoolu abil läbi polüakrüülamiidgeeli pooride. Selle saavutamiseks polümeriseeritakse akrüülamiidi-bisakrüülamiidi segu (polüakrüülamiid) ammooniumpersulfaadi (APS) lisamisega. Reaktsioon, mida katalüüsib tetrametüületüleendiamiin (TEMED), moodustab võrgutaolise struktuuri pooridega, mille kaudu analüüdid saavad liikuda (joonis 2). Mida suurem on kogu akrüülamiidi protsent geelis, seda väiksem on pooride suurus, seega seda väiksemad on valgud, mis läbivad. Akrüülamiidi ja bisakrülamiidi suhe mõjutab ka pooride suurust, kuid seda hoitakse sageli konstantsena. Väiksemad poorid vähendavad ka kiirust, millega väikesed valgud suudavad geelist läbi liikuda, parandades nende eraldusvõimet ja takistades nende kiiret puhvrisse voolamist voolu rakendamisel.
Seadmed polüakrüülamiidgeelelektroforeesiks
Geelelektroforeesi element (paak/kamber)
Polüakrüülamiidgeelelektroforeesi (PAGE) geelipaak erineb agaroosgeelipaagist. Agaroosigeeli paak on horisontaalne, PAGE paak aga vertikaalne. Vertikaalse elektroforeesielemendi (paak/kamber) abil valatakse kahe klaasplaadi vahele õhuke geel (tavaliselt 1,0 mm või 1,5 mm) ja paigaldatakse nii, et geeli alumine osa sukeldub ühes kambris olevasse puhvrisse ja ülemine osa sukeldatakse puhvrisse. teises kambris. Voolu rakendamisel liigub väike kogus puhvrit läbi geeli ülemisest kambrist alumisse kambrisse. Tugevate klambritega, mis tagavad, et koost püsib püstises asendis, hõlbustab varustus kiiret geelijooksu ja ühtlast jahutamist, mille tulemuseks on erinevad ribad.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) toodab erineva suurusega polüakrüülamiidgeelelektroforeesirakke (paagid/kambrid). Mudelid DYCZ-20C ja DYCZ-20G on vertikaalsed elektroforeesirakud (paagid/kambrid) DNA sekveneerimise analüüsiks. Mõned vertikaalsed elektroforeesielemendid (paagid/kambrid) ühilduvad blottimissüsteemiga, näiteks mudelid DYCZ-24DN, DYCZ-25D ja DYCZ-25E ühilduvad Western Blotting süsteemi mudelitega DYCZ-40D, DYCZ-40G ja DYCZ-40F, mida kasutatakse valgumolekuli ülekandmiseks geelist membraanile. Pärast SDS-PAGE elektroforeesi on Western blot meetod spetsiifilise valgu tuvastamiseks valgu segus. Saate valida need blottimissüsteemid vastavalt katsenõuetele.
Elektroforeesi toiteallikas
Geeli jooksmiseks elektri saamiseks vajate elektroforeesi toiteallikat. Liuyi Biotechnology pakub laia valikut elektroforeesi toiteallikaid kõigi rakenduste jaoks. Kõrge stabiilse pinge ja vooluga mudelid DYY-12 ja DYY-12C vastavad kõrgepingenõuete elektroforeesile. Sellel on statiivi, ajastuse, VH ja samm-sammulise rakenduse funktsioon. Need sobivad ideaalselt IEF-i ja DNA sekveneerimise elektroforeesi rakendamiseks. Üldiseks valgu- ja DNA-elektroforeesirakenduseks on meil mudelid DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 jne, mis on ka kuummüügi toiteallikad koos elektroforeesielementidega (paagid/kambrid). Neid saab kasutada kesk- ja madalpinge elektroforeesi rakendustes, näiteks koolilaboris, haiglalaboris ja nii edasi. Rohkem toiteallikate mudeleid külastage meie veebisaiti.
Liuyi kaubamärgil on Hiinas enam kui 50-aastane ajalugu ning ettevõte suudab pakkuda stabiilseid ja kvaliteetseid tooteid kogu maailmas. Läbi aastatepikkuse arengu on see teie valikut väärt!
Meie kohta lisateabe saamiseks võtke meiega ühendust e-posti teel[e-postiga kaitstud] or [e-postiga kaitstud].
Viited Mis on polüakrüülamiidgeelelektroforees?
1. Karen Steward PhD polüakrüülamiidi geelelektroforees, kuidas see töötab, tehnika variandid ja selle rakendused
Postitusaeg: 23. mai-2022