Eelmisel nädalal jagasime mitmeid kaalutlusi tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesi kasutamise kohta ja lõpetame selle teema täna teie jaoks.
Valik Puhvri kontsentratsioon
Tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesis kasutatav puhvri kontsentratsioon on üldiselt madalam kui paberielektroforeesis.Tavaliselt kasutatav pH 8,6Barbitaalpuhver valitakse tavaliselt vahemikus 0,05 mol/L kuni 0,09 mol/L.Kontsentratsiooni valimisel tehakse esialgne määramine.Näiteks kui elektroforeesikambris oleva elektroodide vahelise membraaniriba pikkus on 8–10 cm, on membraani pikkuse sentimeetri kohta vaja pinget 25 V ja voolutugevus peaks olema 0,4–0,5 mA membraani laiuse sentimeetri kohta.Kui neid väärtusi ei saavutata või neid ei ületata elektroforeesi käigus, tuleb puhvri kontsentratsiooni suurendada või lahjendada.
Liiga madal puhvri kontsentratsioon põhjustab ribade kiiret liikumist ja ribalaiuse suurenemist.Teisest küljest aeglustab liiga kõrge puhvri kontsentratsioon ribade migratsiooni, muutes teatud eraldusribade eristamise keeruliseks.
Tuleb märkida, et tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesi korral juhitakse oluline osa voolust läbi proovi, mis tekitab märkimisväärsel hulgal soojust.Mõnikord võib valitud puhvri kontsentratsiooni pidada sobivaks.Kõrgendatud keskkonnatemperatuuri tingimustes või kõrgema pinge kasutamisel võib aga kuumusest tulenev vee aurustumine intensiivistuda, mille tulemuseks on liialt kõrge puhvri kontsentratsioon ja isegi membraani kuivamine.
Näidismaht
Tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesi korral määravad proovi mahu mitmesugused tegurid, sealhulgas elektroforeesi tingimused, proovi enda omadused, värvimismeetodid ja tuvastamismeetodid.Üldpõhimõttena võib öelda, et mida tundlikum on tuvastamismeetod, seda väiksem võib olla proovi maht, mis on eraldamisel kasulik.Kui proovi maht on liiga suur, ei pruugi elektroforeetilised eraldusmustrid olla selged ja värvimine võib samuti olla aeganõudev.Eraldatud värvitud ribade kvantitatiivsel analüüsimisel kolorimeetriliste elueerimismeetodite abil ei tohiks aga proovi maht olla liiga väike, kuna see võib teatud komponentide puhul põhjustada madalamaid neeldumisväärtusi, mis toob kaasa suuremad vead nende sisalduse arvutamisel.Sellistel juhtudel tuleks proovi mahtu vastavalt suurendada.
Tavaliselt on proovi pealekandmisjoone igale sentimeetrile lisatud proovi maht vahemikus 0,1 kuni 5 μL, mis vastab proovikogusele 5 kuni 1000 μg.Näiteks rutiinse seerumi valgu elektroforeesi analüüsis ei ületa igale manustamisjoone sentimeetrile lisatud proovi maht üldiselt 1 μL, mis vastab 60–80 μg valgule.Kui aga analüüsida lipoproteiine või glükoproteiine sama elektroforeesimeetodiga, tuleb proovi mahtu vastavalt suurendada.
Kokkuvõttes tuleks eelkatsete seeria abil valida konkreetsete tingimuste põhjal kõige sobivam proovi maht.
Värvimislahuse valik
Tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesis eraldatud ribad värvitakse tavaliselt enne tuvastamist.Erinevad proovikomponendid nõuavad erinevaid värvimismeetodeid ja tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesiks sobivad värvimismeetodid ei pruugi olla filterpaberi puhul täielikult kasutatavad.
Värvimislahuse valimisel on kolm peamist põhimõtettselluloosatsetaadi membraan.Esiteks,Eelistada tuleks vees lahustuvaid värvaineid alkoholis lahustuvatele värvidele, et vältida membraani kokkutõmbumist ja viimase värvimislahusest tingitud deformatsioone.Pärast värvimist on oluline membraani loputada veega ja minimeerida värvimise kestust.Vastasel juhul võib membraan kõverduda või kokku tõmbuda, mis võib mõjutada edasist tuvastamist.
Teiseks on eelistatav valida proovi jaoks tugeva värvimisafiinsusega värvained.Seerumi valkude tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesil kasutatakse tavaliselt aminomust 10B, kuna sellel on tugev värvimisafiinsus erinevate seerumivalgu komponentide suhtes ja selle stabiilsus.
Kolmandaks tuleks valida usaldusväärsed kvaliteetsed värvained.Mõned värvained võivad hoolimata sama nimetusest sisaldada lisandeid, mille tagajärjeks on pärast värvimist eriti tume taust.See võib isegi hägustada algselt hästi eraldatud ribasid, muutes neid raskesti eristatavaks.
Lõpuks on oluline valida värvimislahuse kontsentratsioon.Teoreetiliselt võib tunduda, et suurem värvimislahuse kontsentratsioon tooks kaasa proovikomponentide põhjalikuma värvimise ja paremad värvimistulemused.See aga nii ei ole.Seondumisafiinsus proovi komponentide ja värvaine vahel on teatud piiriga, mis ei suurene koos värvimislahuse kontsentratsiooni suurenemisega.Vastupidi, liiga kõrge värvimislahuse kontsentratsioon mitte ainult ei raiska värvi, vaid raskendab ka selge tausta saavutamist.Veelgi enam, kui värvi intensiivsus jõuab teatud maksimumväärtuseni, ei järgi värvi neeldumiskõver lineaarset seost, eriti kvantitatiivsete mõõtmiste puhul. Tselluloosatsetaatmembraani elektroforeesi korral on värvimislahuse kontsentratsioon üldiselt madalam kui paberi elektroforeesis kasutataval.
Üksikasjad, mida Pekingi Liuyi biotehnoloogia kohta teada saada's tselluloosatsetaadi membraanelektroforeesipaak ja selle elektroforeesirakendus, külastage siin:
lKatse seerumivalgu eraldamiseks tselluloosatsetaatmembraaniga
lTselluloosatsetaatmembraani elektroforees
lTselluloosatsetaatmembraani elektroforeesi kasutamisel tuleks meeles pidada mitmeid asjaolusid (1)
Kui teil on meie toodete ostuplaan, võtke meiega kindlasti ühendust.Võite saata meile sõnumi e-posti aadressile[e-postiga kaitstud]või[e-postiga kaitstud], või helistage meile numbril +86 15810650221 või lisage Whatsapp +86 15810650221 või Wechat: 15810650221.
Viide:Elektroforees (teine väljaanne), autor hr Li
Postitusaeg: juuni-06-2023